循环肿瘤细胞临床应用的研究进展

来源: | 作者:admin | 发布时间: 2020-07-17 | 3127 次浏览 | 分享到:

CTC，能更高效地捕获CTC，捕获效率约为90%，更适合大规模生产。但是，这类芯片所捕获的CTC被固定在抗体包被的装置表面，难以进一步分离。虽然胰蛋白酶能将CTC从装置表面消化并释放，但是经胰蛋白酶消化释放的CTC可能失去很多有意义的表面受体。第三代芯片以CTC-iChip为代表，包括Ephesia公司的Ephesia，Cynvenio公司的Liquid Biopsy和Fluxion公司的Isoflux微流免疫磁珠富集，这类芯片将免疫磁珠和微流控富集技术相结合，捕获效率与第二代芯片相当。以上芯片均基于CTC化学特性或表面生物标志物进行分离，目前也有基于CTC物理特性进行分选的分离技术，包括基于细胞大小和变形性差异的芯片技术，基于细胞力学性质的芯片技术和基于细胞介电性质的双向电泳技术等。

CTC检测主要包括从蛋白、染色体、DNA和RNA水平实现对肿瘤细胞的定性工作。在蛋白水平，利用免疫荧光标记，如选用CD45-/CK+/DAPI+作为肿瘤细胞定性的标志物，EPISPOT方法可以区分凋亡和有活性的CTC。细胞骨架蛋白对上皮细胞具有特异性，因此细胞角蛋白家族成员（CK8、CK18和CK19）也成为检测上皮表型CTC的标志物。鉴于上皮标志物的局限性，针对干细胞标志物（CD133），间充质标志物（波形蛋白）和肿瘤组织特异性抗原，例如前列腺特异性抗原（PSA）、乳腺特异性抗原乳珠蛋白等也被用于CTC检测。在染色体水平，荧光原位杂交技术能检测特定染色体的扩增情况和靶基因的扩增情况；在DNA水平，基因测序和ARMS可以检测到丰度低至0.1%~1.0%的突变基因；在RNA水平，基因表达图谱和qPCR技术可检测CTC基因表达水平。

03 CTC对肿瘤早期诊断的作用

传统的影像学检查难以发现肿瘤早期病灶。当病灶＜1 cm时，CTC检测有可能早于影像学或临床表现发现肿瘤，从而实现早期诊断。法国巴斯德医院一项研究纳入了168例慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）患者、42例吸烟者和35名健康人，研究发现168例COPD患者中CTC阳性的5例患者在随访的5年内均被诊断为肺癌。基于此项研究结果，LEROY等在法国21个研究中心开展了一项前瞻性、非随机、多中心、双盲AIR研究（NCT02500693），以期在肺癌高危人群（吸烟者、COPD患者等）中探讨CTC对肺癌发生的预测作用。近年研究还发现具有特定核型或分子标记的CTC在肿瘤早期诊断中发挥了重要作用。一项纳入136例新诊断的非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者、142例肺部良性疾病患者和32名健康受试者的临床研究，通过阴性富集技术和FISH技术检测8号染色体扩增型CTC，发现CTC数量能较好地区分NSCLC及肺部良性疾病患者。CTC中8号染色体的计数和非整倍性还在鼻咽癌早期诊断中有一定临床意义。近期的一项研究在低剂量CT提示肺部结节的患者中，以组织活检结果作为对照，通过检测10q22.3/CEP10和3p22.1/3q29 FISH探针标记的CTC，与组织活检相比，10q22.3/CEP10和3p22.1/3q29标记的CTC诊断肺癌的准确性为94.2%，敏感性为89.0%，特异性为100.0%。在乙肝相关肝细胞癌中，干细胞样CTC对早期肝细胞癌诊断具有较高的敏感性（82.1%）和特异性（94.2%），并且能区分肝癌、乙肝和肝硬化。此外，CTC与其他肿瘤标志物联合也有助于提高肿瘤早期诊断的准确性。一项纳入155例前列腺癌患者的研究发现，PSA、CTC和12基因检测平台结合后，诊断的准确性达92.7%，CTC还与更高的Gleason评分和高风险相关。CTC与包含CCNE2、DKFZp762E1312、EMP2、MAL2、PPIC和SLC6A8的6基因检测平台相结合也有助于女性生殖系统肿瘤的早期诊断，联合诊断宫颈癌的准确率达44%，对子宫内膜癌诊断准确率达64%，对卵巢癌诊断准确率为19%。